Sau hai ngày giao tranh, đội quân Hy Lạp vẫn đứng vững. Sang ngày thứ ba, một người dân địa phương tên là Malian Ephialtes (Andrew Tiernan), do lóa mắt trước những đồng tiền của Xerxes, đã chỉ cho quân Ba Tư con đường độc đạo trên núi. Con đường này dẫn quân Ba Tư tới phía sau nơi phòng thủ của quân Hy Lạp. Bị tấn công bất ngờ, Leonidas chia quân làm hai. Đạo quân 300 người của ông cùng 700 lính tình nguyện của thành bang Thespian ở lui vào khe núi để cầm chân quân Ba Tư, số còn lại rút về phía nam để bảo toàn lực lượng cho những trận chiến sau này.

Sự kháng cự kiên cường của Leonidas và các binh sĩ cảm tử giúp các thành bang Hy Lạp có một khoảng thời gian quý báu để chuẩn bị cho một trận thủy chiến – yếu tố có vai trò quyết định đối với kết cục của chiến tranh. Trong khi đó thì đội quân cảm tử, bị tấn công từ cả mặt trước và sau, chiến đấu ngoan cường cho tới người cuối cùng. Leonidas cũng tử trận. Vượt qua cửa ải Thermopylae, đoàn quân Ba Tư thẳng tiến về phía nam để rồi gặp thủy quân Hy Lạp ở eo biển Salamis.

Do được chuẩn bị kỹ lưỡng nên quân Hy Lạp đã đánh tan thủy quân Ba Tư bị vắt kiệt sức bởi những cuộc hành quân dài. Xerxes buộc phải chạy sang châu Á, trao quyền chỉ huy đạo quân còn lại ở Hy Lạp cho tướng Mardonius, em rể của ông ta. Mardonius đưa quân về thành phố Plataea để lập một phòng tuyến ở đó. Quân đội của thành bang Sparta và các thành bang khác dồn toàn lực tấn công Plataea để chấm dứt chiến tranh ...

Tái hiện lại một trận đánh có thật, nhưng 300 không hoàn toàn tuân theo các tài liệu lịch sử. Đạo diễn Zack Snyder cho biết trang phục, vũ khí và kiểu chiến đấu của các chiến binh Hy Lạp, đặc biệt là quân lính của thành bang Sparta, đã được thay đổi chút ít so với sử sách. Ông khẳng định rằng thay đổi là cần thiết để tạo cảm hứng cho khán giả.

Phim được quay trong 60 ngày. Tất cả cảnh được quay trên nền xanh ở thành phố Montreal, Canada, rồi mang sang Los Angeles để chèn hình ảnh thực địa. Trong số hơn 1.500 cảnh trong phim thì có tới 1.300 cảnh cần tới hiệu ứng hình ảnh.

Quá trình xử lý hậu trường kéo dài gần 1 năm. Phần lớn các cảnh được quay ở tốc độ cao, từ 50 tới 150 khung hình/giây (tốc độ bình thường là 24 khung hình/giây).